Protocolo de qc propóleos

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Published on March 13, 2014

Author: kdcloop

Source: slideshare.net

Protocolo de Control de Calidad PCC-001 Nombres: Daniel Sebastián Parra González (125003); Deisy Fabiola Bastidas Rincón Introducción El propóleo es un material resinoso que se obtiene de los brotes y exudados de los árboles por las abejas (1). Las abejas lo usan para sellar sus colmenas, que además de ayudar en la protección mecánica de la colmena, tiene un efecto funcional importante. Es bastante probable que sirva para el aislamiento térmico de la colmena, protección frente a parásitos y otros microorganismos, además de que sirve para evitar la descomposición de individuos muertos (2). El propóleo rara vez se encuentra disponible en su forma pura. Por lo general se obtiene de las colmenas y contiene impurezas de otros productos de abejas. Se usan en preparados medicinales y en cosméticos. Entre sus usos encontramos que es posiblemente eficaz (clasificación III) para herpes labial y herpes genital (en pomadas al 3%, frente a ungüentos de 5% de aciclovir) además de ser posiblemente eficaz para mejorar cicatrización y reducir el dolor e inflamación tras una cirugía oral. Es posible que tenga un efecto benéfico pero existe insuficiente evidencia para hacer una determinación en heridas de cáncer, tuberculosis, infecciones, cáncer de nariz y garganta, mejorar en la función inmune, úlceras, trastornos estomacales e intestinales, resfriado común, heridas, inflamación y quemaduras menores (3). Composición química Los propóleos están conformados por varios tipos de sustancias entre ellas ceras, resinas, bálsamos, aceites aromáticos y etéreos, polen y demás material orgánico. En cuanto a su composición química, está es bastante compleja por el hecho de que depende mucho de la flora local del área donde es colectado, a grandes rasgos las mayores diferencias las encontramos entre regiones del hemisferio norte (Europa, Rusia, Norte américas) y regiones del hemisferio sur. La mayor diferencia entre estos dos es que en regiones del hemisferio norte existe en general muy poca variabilidad entre muestras ya que las abejas recolectan este material de un tipo de árbol a depender de la región: Populus sp. (Norteamérica) y Betula verrucosa (Rusia). Los propóleos de estas regiones suelen tener un alto contenido en compuestos aromáticos: agliconas de flavonoides, ácidos aromáticos y aceites esenciales (4). En cuanto a los propóleos obtenidos de regiones del hemisferio sur, al tener una variabilidad alta, pueden tener un mayor impacto en terapéutica. Se han logrado identificar flavonoides, ácidos p-cumáricos prenilados, acetofenonas, lignanos, di- y tri- terpenos, compuestos volátiles con terpenoides, azúcares, hidrocarburos, minerales (Ca, Mg, K, Na, Fe y Zn), arcillas (de tierra) (4). La alta variabilidad en este tipo de material se vuelve un problema en el momento de tener en cuenta la necesidad de tener especificaciones para un correcto programa de control de calidad (QC) que permitan asegurar una efectividad similar lote a lote. Tal vez el mayor problema radica en que es muy difícil conocer realmente (usualmente por estudios de palinología) cuál es el material vegetal del que disponen las abejas para su fabricación. Control de calidad Se ha de realizar un análisis de ciertos parámetros pertinentes para la evaluación de la aceptabilidad para el usuario (calidad) de un propóleo comparándolo frente a un estándar de materia prima. El producto es una solución hidroalcohólica de propóleos envasada para su uso como alimento o fitoterapéutico. En Colombia se encuentran una serie de investigaciones hechas para tratar de conocer como es la composición de la población de propóleos colombiana y como es alterada de acuerdo a la región en Colombia de donde se origina. Pero no se dispone de una norma como tal, en donde se especifiquen los requisitos para el adecuado control de calidad de muestras de propóleo, por eso es necesario hacer esto, haciendo la comparación con las normas ya existentes en otros países, la elección de la norma adecuada depende mucho de la cercanía con Colombia del país donde se obtiene la normativa modelo (presencia en el hemisferio sur, continente, etc.) Teniendo en cuenta todo esto se va a usar como norma de evaluación de la calidad, la norma IRAM-INTA–15935

del instituto argentino de normalización (IRAM). Esta norma nos va a proveer con las especificaciones para alcanzar la calidad. Pero se va a usar la norma Rusa RST- RSFSR-317-77 con el fin de poder tener en cuenta algunos aspectos adicionales Descripción inicial El propóleo como materia prima en bruto ha de tener unas características o requisitos sensoriales: Aspecto: Es material lipofílico, duro y quebradizo en frio (<15ºC), pero en caliente se comporta como un material suave, flexible y pegajoso (2). Punto de fusión: Su punto de fusión varía entre 60-70ºC. Olor: Un propóleo de calidad posee un olor aromático que tiende a ser picante. Es bastante característico con notas resinosas (balsámicas). Color: tiende a ser variable a depender del área de colección y la edad, puede ser oscuro, sin brillo, con tonalidad desde marrón a un material poco opaco, brillante y amarillo. Pero suelen verse colores castaños intermediarios (5). Se puede hacer una determinación frente a varios patrones de color. Sabor: Se considera un poco amargo y picante. En cuanto a la caracterización macroscópica se han de describir los aspectos generales relativos a la textura, dureza, gomosidad, residuos de la colmena, astillas, residuos de abejas muertas, presencia de moho, presentación global, densidad y consistencia, informando de todo esto en el momento de inicio de la recepción de la materia prima. (5) Preparación de la muestra para análisis Una vez obtenida la muestra y pesada, se ha de guardar en un ambiente con baja temperatura, protegida de la luz, si es posible en envases de color ámbar. Parámetros químicos cuantitativos (6) Humedad: Se determina por gravimetría, método que consiste en secar de 2 a 5g de muestra en una cápsula previamente pesada y tratada en la estufa, y enfriada, en una estufa a 105°C, y llevar a peso constante (dos pesadas sucesivas no deben diferir en más ± 5 mg). Cenizas: Se determinan por gravimetría, método que consiste en calcinar una porción de muestra previamente pesada (~3g) en mufla a 500°C, y llevar a peso constante (dos pesadas sucesivas no deben diferir en más ± 5 mg). Cera: Se determina por gravimetría sobre el residuo de cera obtenido mediante una extracción con n-hexano, en un equipo Soxhlet de 10g de propóleos, durante el tiempo necesario para extracción total, comprobable, de la cera, y posterior destilación del hexano y secado de la cera en estufa a 105°C. Se lleva a peso constante (dos pesadas sucesivas no deben diferir en más ± 5 mg). Resinas: Se determina por gravimetría del residuo de las resinas obtenidas mediante una extracción con alcohol etílico de 96°, en un equipo Soxhlet de 10g de muestra de propóleos, con posterior destilación del alcohol y secado de la resina en estufa a 105°C. Se lleva a peso constante (dos pesadas sucesivas no deben diferir en más ± 5 mg). Impurezas mecánicas: Se determinan por gravimetría del residuo insoluble que queda en el cartucho del Soxhlet luego de las extracciones de cera (ver Cera), empleando n-hexano, y de resinas (ver Resinas), empleando alcohol etílico, y posterior secado del cartucho en estufa a 105°C. Se lleva a peso constante (dos pesadas sucesivas no deben diferir en más ± 5 mg). Compuestos fenólicos: Se determinan por espectrofotometría de fenoles totales, con el reactivo de Folin-Ciocalteu, trabajando a 765 nm sobre los extractos alcohólicos obtenidos según (ver Resinas), y empleando ácido gálico como patrón. Flavonoides totales: Se determinan por espectros del complejo flavonoide-AlCl3, en medio metanólico, a 425 nm, sobre los extractos alcohólicos obtenidos según (ver Resinas), empleando quercetina dihidratada como patrón. Índice de oxidación: Se mide el tiempo de decoloración de un volumen de 0,05 ml de solución de permanganato de potasio (KMnO4) 0,1 N, agregado a 2 ml de una suspensión acuosa de propóleos (obtenida mediante una extracción de 0,2 g de propóleos con 5 ml de alcohol durante 1 hora, con posterior agregado de 100 ml de agua para análisis y filtrado), y 1ml de solución de ácido sulfúrico al 20%. Parámetros químicos cualitativos Espectrograma en el UV: Se obtiene el espectrograma en el ultravioleta. A partir de una dilución de los extractos alcohólicos obtenidos según (ver Resinas). Se busca obtener un pico de absorción entre 270-310nm Prueba de acetato de plomo Pb(CH3COOH)2: Se utiliza para la identificación de flavonoides. Se pipetean 2.5ml de extracto en un tubo de ensayo y se adicionan 7.0 ml. de etanol al 95% y 0.5 ml. de acetato de plomo al 10%. Se agite bien y se deja en reposo por 24 horas. Un precipitado amarillento o una solución turbia, color amarillo opaco es prueba positiva (7). Prueba de NaOH: Se disuelve aproximadamente un gramo de la muestra en un tubo de ensayo con una solución de hidróxido de sodio al 5%, si es positivo a flavonoides se torna color amarillo. Prueba de Mg/HCl: También conocida como prueba de Shinoda, esta se usa para la identificación de

flavonoides. En un tubo de ensayo se colocan 2.0 ml de extracto y se adiciona una lámina de magnesio metálico y 0.3 ml. de ácido clorhídrico concentrado. Se deja reposar por 10 minutos. Una coloración anaranjada roja, verde, azul o violeta es prueba positiva (7). Índice de yodo (8): Se coloca una muestra de propóleos de 50mg. En un Erlenmeyer con tapón esmerilado NSH- 29, se le agregan 2.5ml de cloroformo y 6.25ml de una mezcla de bromo–yodo, se pone tapón al Erlenmeyer, se humedece con la solución de yoduro de potasio, se agita la solución y se coloca en la oscuridad durante una hora, luego se añaden 5 ml. De solución de yoduro de potasio al 10%, 50ml de agua destilada y 4-7 gotas de la solución de almidón, se agita y se titula con una solución al 0.1% de tiosulfato de sodio hasta que la solución decolore. Al mismo tiempo, y bajo las mismas condiciones, se produce la titulación de la solución de control, que contiene 2.5ml de cloroformo, 6.25ml de bromo-yodo 5ml de agua destilada y 4-7 gotas de solución de almidón.

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