Presentation MSc 2

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Published on February 15, 2014

Author: t_djebaili

Source: slideshare.net

Description

Bioguided purification of active metabolites of an African plant that have antibacterial and anticancer properties

PURIFICATION BIOGUIDÉE DES MÉTABOLITES ACTIFS D’UNE ESPÈCE AFRICAINE AYANT DES PROPRIÉTÉS ANTIBACTÉRIENNES présenté par : Takieddine DJEBAILI Responsable et directeur de stage : En collaboration avec : Pr. Codjo HOUNTONDJI Dr. Gustave AGUIE (Université Paris VI) Pr. Laurence VOUTQUENNE

Nouvelle protéine S. hyacinthoides Purification Composé actif Codjo, Biochimie 1420–1425 (2009) Codjo, African Journal of Biochemistry Research 302-311 (2009)

• 4 espèces étudiées :  S. trifasciata  S. hyacinthoides  S. cylindrica  S. ehrenbergii • Activités signalées:  Analgésique  Antiplasmodiale  Anti-inflammatoire  Anticancéreuse  Antibiotiques • Saponines stéroïdiennes +++ PETTIT, J. Nat. Prod. 729-733 (2005) NGUYEN, Biol. Pharm. Bull. 1414-1421 (2004) AL-FATIMI, Journal of Ethnopharmacology 657–666 (2007) FRANSSEN, Antimicrobial Agents And Chemotherapy 1500-1503 (1997) ANBU, African Journal of Traditional, Complementary and Alternative Medicines 529-533 (2009)

Sucres acétates R1 R2 25-R-Ruscogenin 25-S-Ruscogenin H CH3 (β) H =CH2 Sansevierigenine GONZALEZ et al, Tetrahedron 1289-1297 (1972) MARCELA et al,Phytochemistry 1079-1081 (1996) MIMAKI, Phytochemistry 1325-1331 (1996) PETTIT, J. Nat. Prod. 729-733 (2005) CH3 (α) Neoruscogenin S. hyacinthoides H OH =CH2

Sucres R=H R = sucre S. hyacinthoides : Hydrolyse MARCELA et al,Phytochemistry 1079-1081 (1996) MIMAKI, Phytochemistry 107-111 (1997) S. hyacinthoides S. trifasciata

Feuilles Fraiches de S. hyacinthoides Chauffage Pressage CHCl3:MeOH:H2O – 70:30:5 Extrait Aqueux Marcs Broyage Marcs broyés Lixiviation MeOH/H2O Extrait MeOH 1 Ext aq Lge Ext 2 Ext aq Rsd aq MeOH

3.1 -Extrait Aqueux CHCl3:MeOH:H2O – 70:30:5 Extrait aqueux (3,765g) VLC Gradient : MeOH-H2O (20:80-100:0) 20 : 80 1-2 (3,1 g) 40 : 60 L 100 : 0 3 4-6 7-9 10-12 + L (95 mg) (77 mg) (76+17 mg) (198 mg) Pas de produit pur T 1-2 3 4-6 7-9 10 12 60 : 40 Pas de produit pur

3 (95 mg) CC RP-18 Gradient : MeOH-H2O (20:80-100:0) 20 : 80 1-2 3 (18,5 mg) (17,4 mg) CHCl3: MeOH:H2O – 70:30:5 4 40 : 60 5 (8,6 mg) (5,1 mg) 6-8 9-18 (05 mg) (08 mg) RMN Tryptophane Composé 1 Composé 2 5 20-22 19 (4,1 mg) 100 : 0 20-22 23-28 29 30-36 (4,7 mg) (04 mg) (1,2 mg) (3,1 mg) RMN Kaempférol glycosylé

Composé 1 13C 1H

HMBC COSY HSQC + COSY

3.2 -Extrait Méthanolique Extrait Méthanolique (2,638g) VLC Gradient : MeOH-H2O (40:60-100:0) 1 (1,623g) CHCl3:MeOH:H2O – 70:30:5 T 1 5 3 4 6 7 CHCl3:MeOH– 85:15 T 6 7 8-9 10 11 12+L 2+5 (170mg) 3 (59mg) 100 : 0 80 : 20 60 : 40 40 : 60 4 6 (45mg) 7 8-9 10 11 12+L (21mg) (42mg) (29mg) (65mg) (63mg) (144mg)

12+L (144mg) CC Gradient : C6H6-CHCl3-MeOH (30:70:0 - 0:0:100) 30:70:0 0:99:1 0:100:0 1 2-3 4 7-10 0:98:2 12 13-16 5-6 11 29,2mg CHCl3:C6H6– 80:20 21-25 35-41 42-50 51-60 26-34 3,1mg 0:95:5 61-62 66-71 75-77 78-80 3,2mg 63-65 02mg 72-74 (En cours d’étude) CH3-(CH2) n-CH2-COOH RMN 107-115 RMN Acide gras (En cours d’étude) CH3-(CH2) n-CH2-COOH 5-6 93-95 106 101-105 RMN Acide gras ≥ C16 81-92 96-100 02mg 17-20 0:0:100 0:50:50 Chaine aliphatique (En cours d’étude) CH3-(CH2) n-CH3 Lavage

5-6 29,2mg CC Gradient : C6H6-CH2Cl2-MeOH (70:30:0 - 0:0:100) 60:40:0 70:30:0 1-13 14-16 17-20 (1,5mg) (0,6mg) (0,5mg) 21-24 40:60:0 25-26 (0,7mg) (0,5mg) 27-30 0:100:0 0:0:100 31-50 51-71 72-81 82-91 92-93 Lavage (2,3mg) (5,9mg) (0,7mg) (1,6mg) (4,6mg) (0,5mg) RMN CHCl3 : 100 % β-Sitostérol + Stigmastérol Composé 6 β-sitostérol 31-50 Stigmastérol

10 (65mg) CC Gradient : C6H6-CH2Cl2-MeOH (30:70:0 - 0:0:100) 30:70:0 20:80:0 0:100:0 0:99:1 0:98:2 1-11 12-21 22-31 32-51 52-71 CHCl3:MeOH– 80:20 0:95:5 72-80 84-90 91-95 81-83 RMN 110-111 0:90:10 112-114 115-125 RMN RMN Composé 7 Lavage 175-180 185-200 RMN RMN peptide Saponines stéroïdiques Composé 8 Composé 9 Composé 10 Composé 11 81-83 0:0:100 131-172 173-174 181-184 201-209 126-130 96-109 0:80:20 110-111 126-130 175-180 201-209 (En cours d’étude)

Composé 7 1H 13C

COSY 16/15 26/24 1/2a 16/17 6/7 1/2b 26a/26b 3″/4″ 2″/3″ 4″/5″ 1′/2′ 3′/4′ 2′/3′ 1″/2″ 4′/5′a 4′/5′b 5″/6″

TOCSY 6 3 16 1 26a 21 14 15a 7a + 8 27 24 17 2a 15b 2b 20 7b 4 1′ 4′ 3′ 1″/2″ 1″ 4′ 3′ 2′ 4

HSQC

HMBC 27/24 27/25 12+13/19 18/10 21/20 18/9 14/19 17/21 17/19 27/26 3′/4′ 3′/2′ 1′/1 18/1 21/22 18/5 3′/COCH3

NOESY 6 26 26/27 6/8 26/25 6/7 6/4 1′/1 1″/2′

• 1-O-α-L-rhamnopyranosyl (1->2) 3’,4’diacetyl α-Larabinopyranosyl-ruscogénine

Composés 7, 8, 9 et 10 O OR2 O O HO HO R1 OH HO COCH3 9 1 3 R2 R1 7 8 O O R1O COCH3 R2 H COCH3 H COCH3 7 COCH3 8 H H 9 10 10 COCH3 H H COCH3 HO HO COCH3 OH 25

1 : ANRt seul 2 et 3 : ARNt + Ribosomes + ARNm 4 : idem + methanol 5 : idem + extrait aq brut 6 : idem + extrait MeOH 7 : idem + fraction [1] 8 : idem + fraction [2] 9 : idem + fraction [3-4] 10 : idem + fraction [5-6]

11 Composés isolés  Extrait aqueux :Tryptophane + kaempférol glycosylé  Extrait méthanol : Acides Gras + 4 saponines stéroïdiques à ruscogénine et un peptide Bioguidage indispensable Intérêt thérapeutique majeur E. Coli et cancers

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