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Inmunofluorescencia

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Information about Inmunofluorescencia
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Published on February 18, 2014

Author: RicciBW

Source: slideshare.net

Description

La Inmunofluorescencia es una técnica de inmunomarcaje que se vale del uso de anticuerpos marcados con moléculas fluorescentes para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés en un tejido. órgano, o solución de estudio.
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LICENCIATURA EN BIOLOGIA Inmuno fluorecencia ó ó ó

INMUNOFLUORESCENCIA TÉCNICA INMUNOMARCAJE Desarrollada en 1950 por Coons y Kaplan

INMUNOFLUORESCENCIA TÉCNICA INMUNOMARCAJE Reacción antígeno-anticuerpo Anticuerpos unidos a una sustancia fluorescente

Para demostrar la presencia de una determinada molécula de interés Antígenos

INMUNOFLUORESCENCIA El marcaje está dado por una molécula fluorescente Fluorocromo Aprovecha la interacción antígeno anticuerpo Unión covalente al anticuerpo

INMUNOFLUORESCENCIA El marcaje está dado por una molécula fluorescente Fluorocromo Unión covalente al anticuerpo Preparado biológico Aprovecha la interacción antígeno anticuerpo La muestra puede ser observada Microscopia fluorescente Fotometría

FLUORESCENCIA Propiedad de una sustancia de emitir luz cuando es expuesta a radiaciones de baja longitud de onda y alta energía

FLUORESCENCIA Propiedad de una sustancia de emitir luz cuando es expuesta a radiaciones de baja longitud de onda y alta energía Longitud de onda más larga Luz UV Rojo Amarillo Verde FITC Cianina (Cy5) Rodamina Alexa fluor

APLICACIONES Tinción Presencia y distribución de Proteínas Glúcidos Moléculas pequeñas En: Cortes de tejidos Líneas celulares cultivadas Células individuales Secreciones que contengan células en suspensión

IFD Un único anticuerpo Ag-Ac-Fc Primaria Rápida y poco sensible a interferencias

IFI Dos anticuerpos Ag-Ac-Ac-Fc Secundaria Aplicación en investigación Más lenta y compleja. Sensible a interferencias Permite amplificar la señal No es necesario modificar cada uno de los anticuerpos primarios para acarrear el fluoróforo

IFI Dos anticuerpos Ag-Ac-Ac-Fc Secundaria Aplicación clínica Dos etapas 1 En porta objetos se fijan antígenos como sustrato conocido Se coloca el suero del paciente

IFI Dos anticuerpos Ag-Ac-Ac-Fc Secundaria Aplicación clínica Dos etapas 2 Se agrega la Ig secundaria marcada

INMUNOFLUORESCENCIA Ventajas Rapidez Método relativamente sencillo Alta especificidad y sensibilidad No es necesaria la esterilidad Desventajas Costo de equipo y reactivos Personal capacitado Fotoblanqueo Generalmente no son posibles los análisis in vivo

APLICACIONES Técnicas analíticas (cualitativas y cuantitativas) en Química y Bioquímica. Métodos inmunológicos de diagnóstico médico. Análisis poblacional de células (citofluorimetría de flujo).

APLICACIONES Procedimientos microscópicos en: Microbiología Genética Histología Histoquímica Biología Celular Biología Molecular Neurobiología Biología del Desarrollo Patología

Gracias

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