Aféresis de progenitores hematopoyéticos

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Health & Medicine

Published on February 19, 2014

Author: UbaldoEBedoyaM

Source: slideshare.net

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Recolección de progenitores hematopoyéticos en sangre periférica

AFÉRESIS DE PROGENITORES HEMATOPOYÉTICOS Ubaldo Bedoya M.- Bacteriólogo M. Sc. Biotecnología Versión 003

AFERESIS Técnica mediante la cual se separan los componentes de la sangre, siendo seleccionados los necesarios para su aplicación en medicina y devueltos al torrente sanguíneo el resto de componentes. El objetivo de este proceso es recolectar los PH y conservarlos hasta el momento de la reinfusión con el fin de hacer un rescate de la función hematopoyética. La recolección de PH requiere la administración de citocinas debido a que su concentración en sangre periférica es muy baja además de un equipo separador de células. Carreras, E. et al. Man Trasp Hemop 3ª ed. 2004 www.imatoncomedica.com Versión 003

AFERESIS Criterios para la aceptación de donantes sanos de PH • Controles previos de Hb > 11g/dL , plq > 150.000/mL resultados negativos de HCV, HBsAg y VIH 10 días anteriores. • Si no se consigue la celularidad necesaria con un solo proceso de aféresis y es necesario repetir el procedimiento, el recuento de plaquetas debe ser mayor a 100.000/mL • La edad no debe suele ser un factor limitante. Momento del comienzo Por calendario: • G-CSF por lo general al 4° o 5° día de movilización. • Con QT: depende del esquema, entre 9 y 14 días post QT Según recuento periférico de CD34+ > Mayor a 15 cel/uL www.imatoncomedica.com

AFERESIS El equipo separa las células por centrifugación en sus distintos componentes por gradientes de densidad.  VST = Peso * Cte.  VP = 3-4  # ciclos = VST * VP/ 1000  El anticoagulante de preferencia es ACD-A.  Se hacen 3 volemias máximo 4. Depende de la tolerancia del paciente. Depende del CD34+ La tasa de mortalidad es bastante baja, tres muertes estimadas por 10.000 procedimientos* J Clin Apher. 1990;5(2):70-73 www.imatoncomedica.com Versión 003

Separación de componentes www.imatoncomedica.com

Conexión del paciente al citoseparador www.imatoncomedica.com

Criterios de recolección de PH Para iniciar el proceso de recolección de PH es necesario que el paciente haya sido catalogado como buen movilizador. CD34+ > 10 cel/μL 5° o 9° día de movilización Catéter y recogida Actualmente, se considera mínima una concentración de 2 x 106 células CD34+/kg de peso corporal la cual se obtiene en el 94% de los casos con un recuento de CD34+ preaféresis >20 x 106 cel/uL Concentraciones menores a esta se relacionan con retraso en recuperación de plaquetas. Correlación positiva con el arraigo o prendimiento del injerto* Eur J Haem. 2008. 80(9): 287-295.

Criterios de recolección de PH La ultima dosis de filgrastim o lenograstim debe ser administrada 2 o 3 horas antes del conteo en sangre periférica y 3 o 4 horas antes de la aféresis programada. Pierelli et al. TRANSFUSION. 2012.

Criterios de recolección de PH Constantes según sexo y peso C D 34 P R E A F E R E S I S 0 5 10 15 20 25 30 38 50 70 80 90 110 130 160 200 250 300 1 0 0,2 0,4 0,6 0,8 1 1,3 1,7 2,4 2,8 3,2 3,9 4,5 5,7 7,2 9 10,9 2 0,3 0,5 0,8 1 1,3 1,5 1,9 2,5 3,5 3,9 4,4 5,4 6,4 7,9 9,8 12,3 14,7 VOLEMIAS PROCESADAS 3 0,5 0,8 1,1 1,4 1,7 2 2,5 3,3 4,5 5,1 5,7 6,9 8,2 10 12,4 15,5 18,6 4 0,7 1,1 1,5 1,8 2,2 2,6 3,2 4 5,5 6,2 7 8,4 9,8 12,1 15,1 18,7 22,4 5 1 1,4 1,8 2,3 2,7 3,1 3,8 4,8 6,5 7,4 8,3 10 11,7 14,3 17,7 22 26,3 Sexo masculino Femenino 6 Predicción 1,2 1,7 C 2,2 D 2,7 34 3,2 3,6 P 4,4 O 5,6 S 7,6 8,5 A 9,5 F 11,5 E 13,4 R 16,4 E 20,3 S 25,2 I 30,1 S VOLUMEN SANGUINEO(mL/Kg de peso) Obeso Delgado Normal Muscular 60 65 70 75 55 60 65 70 Predicción de CD34+ Pos aféresis basado en el recuento previo en sangre periférica

Ejemplo Paciente varón con 67 kg CD34+ en aféresis = 1640/μL Vol. de la aféresis = 200 mL Viabilidad = 0,998 # cel/kg peso = cel/μL * Viab * Vol * 1000 Peso pte = 1640*0,998*200*1000 67 = 4.885.731 cel/kg peso > 4 x 106 cel/Kg peso IDEALES www.imatoncomedica.com Versión 003

Ventajas y desventajas Sangre periférica Médula ósea Sin anestesia Extracción única Arraigo más rápido Sin catéteres Menos células tumorales Sin citocinas Requiere más de una aféresis Requiere anestesia gral. Se requiere catéter Arraigo mas lento Hemorragias, embolias e infecciones Mayores tasas de morbi/mort

Efectos adversos  Toxicidad del citrato: hipocalcemia  Trombocitopenia  Hipovolemia  Mal funcionamiento del catéter.  Infección

Recomendaciones  Se realiza hemograma post-aféresis: Plaquetas – Hemoglobina – Leucocitos.  Realizar hemocultivo a las unidades de PH para descartar contaminación.  La mezcla del citrato + heparina disminuye los efectos colaterales del ACD que cuando se emplea solo.  No emplear en caso de historial de reacciones anafilácticas, antecedente de enfermedad autoinmune o inflamatoria.

Unidad de progenitores hematopoyéticos

C R I O P R E S E R VAC I Ó N El objetivo principal de la criopreservación de los progenitores hematopoyéticos es mantener la viabilidad y funcionabilidad de las células a bajas temperaturas durante cortos períodos de tiempo o incluso décadas.

Temperatura de conservación 4º C: Empleo a corto plazo ↓ viabilidad 5% en 24H 50 -70% en 7 días -80º C: Empleo antes de 6 meses -196 º: >6 meses 4°C - 30°C - 80°C : mejor viabilidad Nevera a -84° C.

Lesión por congelación     Daño mecánico por formación de hielo intra y extracelular Daño mecánico por expansión térmica Hiperosmolaridad extracelular y deshidratación Desnaturalización de proteínas

Lesión por congelación Daño osmótico (deshidratación) Espacio extracelular normosmótico. Célula sanguínea normosmolar. Centros de nucleación de hielo. Célula sanguínea deshidratada. Espacio extracelular hiperosmolal.

Lesión por congelación Daño mecánico Célula sanguínea. Centros de nucleación de hielo. Célula sanguínea destruida.

CRIOPROTECTORES Características:  Sustancias muy hidrosolubles  Baja toxicidad  Disminuyen punto eutéctico de una solución  T° mínima a la que una solución esta en estado liquido  Pueden ser penetrantes y no penetrantes

CRIOPROTECTORES Las substancias crioprotectoras más utilizadas son:      DMSO (dimetilsulfóxido). Proteínas. Soluciones salino/glucosadas. HES (hidroxietilalmidón). Glicerol. Transfus Med Hemother 2011;38:107–123

CRIOPROTECTORES Espacio extracelular normosmótico. Molécula de DMSO. Célula sanguínea. Célula sanguínea con poco estrés osmótico. Centros de nucleación de hielo. Espacio extracelular ligeramente hiperosmolal.

Propiedad coligativa de los solutos. 0ºC Solución eutéctica (con menor punto de congelación). 0ºC Solución .superenfrianda Centros de nucleación de hielo. 0ºC 0ºC Solución eutéctica con más solutos segregados (aún con menor punto de congelación).

CRIOPRESERVACIÓN DE PHSP • DMSO utilizado a una concentración final del 5-10% en solución proteica ( plasma autólogo o albumina humana) • DMSO tóxico celular > 4°C: mezcla de las soluciones celular y criopreservante se hace a 4°C • Mezcla de DMSO y fracción proteica: 30 minutos antes.

CRIOPROTECTORES PROTEINAS • Aumentan la supervivencia de las células ya que modifican la viscosidad y la temperatura de la transición hialina de la solución crioprotectora. • La fuente puede ser autóloga: plasma • Albumina humana al 4%

ALMACENAMIENTO • Congeladores mecánicos de-120 a -86°C • Almacenamiento de células criopreservadas es en bolsas de plástico de PVC/poliolefin y en frascos de polietileno. De la bolsa de recolección a la de criopreservación

DESCONGELAMIENTO Descongelamiento rápido  Se tiene mejor viabilidad celular con descongelamiento rápido  Se colocan las bolsas en baño de maría entre 37 y 42°C. Agua destilada.  Cerciorarse de que toda la bolsa quede sin grumos.  Se realiza en la habitación del paciente.  El orden de descongelación/infusión de las bolsas (en caso de ser + de una) será de mayor a menor celularidad CD 34+.

CONTROL DE CALIDAD Prueba de viabilidad por exclusión con tinción azul de trípano o citometría de flujo: CD34+ y 7AAD La viabilidad post aféresis permite compararla con la preaféresis Ideal superior al 90%

BIBLIOGRAFIA 1. Smith DM, Ness MJ, Landmark JD, Haire WW, Kessinger A. Recurrent neurologic symptoms during peripheral stem cell apheresis in two patients with intracranial metastases. J Clin Apher. 1990;5(2):70-73. 2. Movilización y aféresis de las células madre hematopoyéticas: Guía práctica para el personal de enfermería y otros profesionales de la atención sanitaria relacionados. EBMT. 2009. 3. Carreras, E. et al. Manual de Trasplante Hemopoyético. 3° Ed. Pag 259-263. 2004. 4. Conference report: Best practice for peripheral blood progenitor cell mobilization and collection in adults and children: results of a Società Italiana Di Emaferesi e Manipolazione Cellulare (SIDEM) and Gruppo Italiano Trapianto Midollo Osseo (GITMO) consensus process_3385. 2011 5. Esa Jantunen, Taru Kuittinen. Blood stem cell mobilization and collection in patients with lymphoproliferative diseases: practical issues. Eur J Haem. 2008 6. Armitage, S. et al. CD34 counts to predict the adequate collection of peripheral blood progenitor cells. Bone Marrow Transplant 1997;20:587–91. 7. Cryopreservation of Human Stem Cells for Clinical Application: A Review Transfus Med Hemother 2011;38:107–123. 8. Pierelli et al. Best practice for peripheral blood progenitor cell mobilization and collection in adults and children: results of a Società Italiana Di Emaferesi e Manipolazione Cellulare (SIDEM) and Gruppo Italiano Trapianto Midollo Osseo (GITMO) consensus process_3385 1..13. TRANSFUSION. 2012

Gracias #aferesisTAMO Versión 003

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