Actuales fronteras del diagnóstico de TB (el verdadero aporte de las herramientas moleculares)

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Published on February 25, 2014

Author: Vallecausanos

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Actuales fronteras del diagnóstico de TB (el verdadero aporte de las herramientas moleculares)
Juan Carlos Rozo A

CURSO TALLER “TUBERCULOSIS: ENFERMEDAD DE MUCHOS, LUCHA DE TODOS” Actuales fronteras del diagnóstico de TB (el verdadero aporte de las herramientas moleculares) Juan Carlos Rozo A

Contenido

Contenido • Diagnóstico de la TB (sensible/resistente) – Toma de muestras: esputo de calidad – Como interpretar el rendimiento del BK – Ventajas del cultivo – Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Contenido • Diagnóstico de la TB (sensible/resistente) – Toma de muestras: esputo de calidad – Como interpretar el rendimiento del BK – Ventajas del cultivo – Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Toma de muestras: esputo de calidad Antes de tomar la muestra – Utilizar la palabra que lo identifica en cada lugar (gallo, pollo, gargajo, del fondo del pecho, etc)

Envase • Boca ancha • Capacidad entre 30 y 50 ml • Cierre hermético de rosca • Material plástico transparente, resistente a roturas

Indicaciones al SR • Enjuagar la boca con agua únicamente • Inspirar profundamente • Retener el aire • Expulsar la expectoración tratando de arrastrar las secreciones • Recoger la muestra en el envase • Repetir la operación • Tapar y limpiar el exterior • Lavar las manos

• La muestra Salival Mucopurulenta Hemoptoica Mucosa AFB Microscopy training. Akiko Fujiki. RIT, UICTER, USAID. Chapter II. pag 47.

Contenido • Diagnóstico de la TB (sensible/resistente) – Toma de muestras: esputo de calidad – Como interpretar el rendimiento del BK – Ventajas del cultivo – Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership

Baciloscopia

Ventajas Sencilla Bajo costo Resultados rápidos No requiere equipo especial Ampliar cobertura Desventajas

Número de muestras 1a. 2a. 3a. 80% 10% 5%

Ziehl-Neelsen Auramina O The Handbook: Laboratory diagnosis of tuberculosis by sputum microscopy. The handbook. Global edition. StopTB Partnership

Ziehl-Neelsen Auramina Cattamanchi, Huang, Worodria, et al. 2011. Integrated Strategies to Optimize Sputum Smear Microscopy A Prospective Observational Study. Am J Respir Crit Care Med Vol 183. pp 547–551.

Fluorescencia Manel Marzouk, Asma Ferjani, Mohamed Dhaou, Moufida Haj Ali, Naila Hannachi, Jalel Boukadida . 2013. Comparison of LED and conventionalfluorescence microscopy for detection of acid-fast bacilli in an area with high tuberculosis incidence. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease, Volume 76, Issue 3, July, Pages 306-308

Concentración de la muestra Sharon L. Reed, Girmachew Mamo, Elias Gossa, Michele Jasura, Muluwork Getahun, Eshetu Lemma, Christopher Mathews, J. Allen McCutchan. 2011. Improved tuberculosis smear detection in resource-limited settings: Combined bleach concentration and LED fluorescence microscopy. International Health, Volume 3, Issue 3, September , Pages 160-164

Concentración de la muestra Farhana Runa, Mahmuda Yasmin, Mohammad Mozammel Hoq, Jahanara Begum, Abu Sadeque Mohammed Matiur Rahman, Chowdhury Rafiqul Ahsan. 2011. Molecular versus conventional methods: Clinical evaluation of different methods for the diagnosis of tuberculosis in Bangladesh. Journal of Microbiology, Immunology and Infection, Volume 44, Issue 2, April, Pages 101-105

Concentración de muestras paucibacilares Ramachandran Vignesh, Chinnambedu R. Swathirajan, Suniti Solomon, Greer Waldrop, Sunil S. Solomon, Chandrasekaran Ezhilarasi, Pachamuthu Balakrishnan. 2013. Could concentrating single sputum improve the performance of smear microscopy in detecting TB among HIV patients?. Journal of Infection, Volume 66, Issue 4, April , Pages 388-390.

Métodos de concentración Karen R Steingart, Vivienne Ng, Megan Henry, Philip C Hopewell, Andrew Ramsay, Jane Cunningham, Richard Urbanczik, Mark D Perkins, Mohamed Abdel Aziz, Madhukar Pai. 2006. Sputum processing methods to improve the sensitivity of smear microscopy for tuberculosis: a systematic review. The Lancet Infectious Diseases, Volume 6, Issue 10, October , Pages 664-674

Contenido • Diagnóstico de la TB (sensible/resistente) – Toma de muestras: esputo de calidad – Como interpretar el rendimiento del BK – Ventajas del cultivo – Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Cultivo En caso de que las dos baciloscopias iniciales sean negativas, se deberá cultivar la segunda muestra de esputo Todas las muestras de origen extrapulmonar Para diagnóstico de TB infantil Población de alto riesgo Todo paciente que haya sido diagnosticado por cultivo Circular externa 00058 de 2009

Medios de cultivo Medio a base de huevo: —Ogawa —Lowestein-Jensen (LJ) —ATS —Stonebrink —Coletsos Medios- agar —Middlebrook 7H10/7H11 —HSTB Medios líquidos —Middlebrook 7H9/7H12 —Sistemas automatizados

Cultivo tradicional Cultivo Automatizado

Comparación LJ-Ogawa PARIMANGO RODRIGUEZ, Diana, CHAVEZ CASTILLO, Milciades, LUJAN VELASQUEZ, Manuela et al. Comparación de los medios Ogawa y Löwenstein-Jensen en el aislamiento de Mycobacterium tuberculosis de pacientes con tuberculosis pulmonar. Hospital Regional Docente de Trujillo, Perú. Rev. Med. Vallejiana, 2007, vol.4, no.1, p.24-31. ISSN 1817-2075.

Comparación Ogawa-MGIT Alonso Soto, Juan Agapito, Carlos Acuña-Villaorduña, Lely Solari, Frine Samalvides, Eduardo Gotuzzo. 2009. Evaluation of the performance of two liquid-phase culture media for the diagnosis of pulmonary tuberculosis in a national hospital in Lima, Peru. International Journal of Infectious Diseases 13, 40—45.

Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22

Procesamiento de la muestra para el cultivo Manual para el diagnóstico bacteriológico de la tuberculosis. Normas y guía técnica. Parte II Cultivo. 2008. OPS. Pag 22

BK Especificidad 98% Sensibilidad 60% Detección: 10.000 bacilos/c.c. Cultivo Especificidad 99% Sensibilidad 90% Detección: 10 bacilos/c.c.

Cultivo con crecimiento

Identificación de micobacterias – – – – Coloración para verificar (ZN / KY) Tasa de crecimiento Morfología Detección de Niacina – Reducción de Nitratos – Actividad Catalasa Temperatura ambiente 68°C

Alternativas

Contenido • Diagnóstico de la TB (sensible/resistente) – Toma de muestras: esputo de calidad – Como interpretar el rendimiento del BK – Ventajas del cultivo – Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Herramientas moleculares. ¿Cuándo usarlas?

Detección de resistencia en TB Todos los casos sospechosos de ser resistentes a los fármacos anti TB Muestras de los pacientes con diagnóstico de VIH Contactos de un caso indice de TB resistente o multiresistente Pacientes en tratamiento cuya baciloscopia de control de segundo mes sea positiva Pacientes de reingreso por abandono, recaída o fracaso Circular externa 00058 de 2009

Detección de resistencia en TB Detección Molecular Fenotípico

Detección Molecular GeneXpert GenoType MTBDRplus GenoType MTBDRsl

Detección Molecular GeneXpert Rifampicina 96% rpoB

Detección Molecular GenoType MTBDRplus Rifampicina rpoB Isoniacida katG 10-20 % inhA ahpC kasA ndh ceoA mabA oxyR acpM furA

Diagnóstico Molecular GenoType MTBDRsl Fluoroquinolonas gyrA 75-94% Aminoglucósidos y péptidos cíclicos rrs gyrB Etambutol Estreptomicina-Amikacina-Kanamicina-Capreomicina rpsL 56-60% S S 10-15% - KAN: 65-84% tlyA 5% CAP AMK: 92% - CAP: 86% embB embA 47-65% embC

Riesgos del mal uso de GeneXpert Deborah A. Williamson⁎, Indira Basu, James Bower, Joshua T. Freeman, Gillian Henderson, Sally A. Roberts. 2012. An evaluation of the Xpert MTB/RIF assay and detection of false-positive rifampicin resistance in Mycobacterium tuberculosis. Diagnostic Microbiology and Infectious Disease 74 (2012) 207–209

Bunsow E, et al., Evaluation of GeneXpert MTB/RIF for the detection of Mycobacterium tuberculosis and resistance to rifampin in clinical specimens, J Infect (2013), http://dx.doi.org/10.1016/j.jinf.2013.11.012

Detección Fenotípico

Detección Fenotípico PRUEBAS DE ÓXIDO - REDUCCIÓN Directas Indirectas MICROSCOPIC OBSERVATION DRUG SUSCEPTIBI-LITY (MODS) Bactec MGIT Método de proporciones múltiples en agar

Diagnóstico Fenotípico

Diferencias entre los métodos fenotípicos Susceptibility testing of Mycobacteria, Nocardia, and other aerobic Actinomicetes; approved standard – Second edition. M24-A2. Vol 31. No 5. CLSI.

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

Policy Framework for Implementing New Tuberculosis Diagnostics. 2010. WHO

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Genotipificación

Epidemiología molecular

Complementando la epidemiología clásica

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